Es porque las etiquetas de afinidad son tan útiles que tendrías que estar loco o desesperado por insistir en usar los enfoques de la vieja escuela.
Una etiqueta de afinidad es simplemente una proteína que es capaz de unirse de manera un tanto estrecha a un ligando de molécula pequeña, un ion o incluso a otra proteína. Los ejemplos más útiles de estos son 6x-His (que son solo seis histidinas en una fila), proteína de unión a maltosa (MBP), glutatión-S-transferasa (GST), proteína A y las etiquetas de epítopo FLAG, Myc, HA y otros. Cada una de estas es proteína que se une a otra cosa, y para todas las etiquetas que he enumerado, hemos descubierto cómo conjugar esa otra cosa con un soporte sólido, para que pueda obtener una depuración decente de extractos de células completas simplemente agregando el ligando de fase sólida al extracto, centrifugándolo para llevar el soporte sólido al fondo del tubo y tirando el sobrenadante.
El uso de estas etiquetas tiene tres grandes ventajas:
- Son proteínas, por lo que se pueden agregar a una proteína que le interese simplemente uniendo dos pedazos de ADN, lo cual es casi trivial hacerlo ahora. Este constructo de expresión se traduce como una proteína por el ribosoma y está más o menos listo para estudiar.
- La estrategia de purificación que usa es impulsada por la etiqueta, no por la proteína etiquetada. Una vez que sepa cómo purificar una proteína con una etiqueta de afinidad dada, tiene una idea bastante buena de cómo purificar la mayoría de las proteínas con la misma etiqueta.
- Puede sobreexpresar su proteína en una especie diferente para obtener más de lo que podría esperar purificar del tejido nativo.
Los métodos de la vieja escuela para purificar proteínas sin etiquetar deben inventarse desde cero para cada proteína que desee purificar, y requieren GRANDES cantidades de material de entrada para obtener rendimientos de proteína que realmente puede estudiar. Si le interesa la bioquímica de una proteína que se expresa solo en los espermatozoides, lo cual es más atractivo: ¿recolectar frascos de semen de toro o producir bacterias que produzcan la proteína para usted?
