En la PCR de colonias, en realidad requiere una cantidad increíblemente pequeña de células para obtener un resultado positivo y la cantidad mínima de muestra que puede obtener con la mejor. Al resolver problemas, es tentador simplemente agregar más para intentar obtener una señal más fuerte; sin embargo, con el aumento en el volumen adicional de células que agrega a la muestra, también está aumentando la concentración de varios inhibidores de PRC presentes en las células y esto evitará una señal positiva. En cuanto a la técnica, lo que hago es simplemente sumergir una punta de pipeta estéril en un cultivo turbio (sin siquiera pipetear arriba y abajo), luego sumergir brevemente la punta de la pipeta en la mezcla de PCR y esto proporcionará una cantidad suficiente de ADN para obtener una resultado positivo. Como su control positivo está funcionando bien, usted sabe que sus cebadores son buenos y que las condiciones de la PCR son buenas, pero si la banda aún es débil, simplemente podría aumentar el número de ciclos para obtener una banda más fuerte.
¿Los PCR de colonias a veces requieren grandes cantidades de células para producir bandas fuertes?
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