¿Los PCR de colonias a veces requieren grandes cantidades de células para producir bandas fuertes?

En la PCR de colonias, en realidad requiere una cantidad increíblemente pequeña de células para obtener un resultado positivo y la cantidad mínima de muestra que puede obtener con la mejor. Al resolver problemas, es tentador simplemente agregar más para intentar obtener una señal más fuerte; sin embargo, con el aumento en el volumen adicional de células que agrega a la muestra, también está aumentando la concentración de varios inhibidores de PRC presentes en las células y esto evitará una señal positiva. En cuanto a la técnica, lo que hago es simplemente sumergir una punta de pipeta estéril en un cultivo turbio (sin siquiera pipetear arriba y abajo), luego sumergir brevemente la punta de la pipeta en la mezcla de PCR y esto proporcionará una cantidad suficiente de ADN para obtener una resultado positivo. Como su control positivo está funcionando bien, usted sabe que sus cebadores son buenos y que las condiciones de la PCR son buenas, pero si la banda aún es débil, simplemente podría aumentar el número de ciclos para obtener una banda más fuerte.