¿Se puede usar sulfato de gentamicina en lugar de G-418 para la selección de resistencia neo en células de mamíferos?

La respuesta corta es No.

Como la gentamicina es un antibiótico bactericida, es decir, mata bacterias al inhibir su actividad ribosómica, puede usar el gen Gm (R) [gen de resistencia a la gentamicina] como marcador de selección solo para transformaciones bacterianas. Aprovechando el efecto bactericida de Gm, también puede usar el antibiótico Gm en el cultivo de células de mamíferos, solo con el propósito de matar bacterias en un medio de cultivo, no como un marcador de selección.

Por ejemplo, cuando se utiliza el sistema Bac-to-Bac (de la producción Bacteria a Baculovirus), utilizando el vector pFastBac1, contiene el gen Gm (R) en la construcción que permite seleccionar su GOI (gen de interés) en la generación Bacmid . Gm (R) es un marcador de selección para células huésped DH10Bac.

G418 (geneticina) o Neomicina funcionan como marcadores de selección , tanto en procariotas como en eucariotas. Al crear una línea celular estable, primero debe asegurarse de que su vector que está transfectando en una línea celular tenga un gen Neo / Kan (R) en el plásmido. En este escenario, pCNDA3.1 (+/-), por ejemplo, es su elección para la clonación. Asegúrese de linealizar su plásmido antes de la transfección.

Dado que la resistencia a la geneticina varía desde líneas celulares hasta líneas celulares, no existe una concentración universal que funcione. Primero necesita verificar la concentración basal de que su línea celular sería eliminada. Por lo general, oscila entre 100-800ug / ml.

Abril-02-2017

Mientras que la gentamicina puede utilizarse para tener cultivos de células de mamíferos libres de bacterias, no funciona como un marcador de selección porque no tiene ningún efecto negativo o positivo en las células eucariotas. G-418 funciona como un marcador de selección porque cuando transfectas tus células eucarióticas con un vector con el ” gen neo ” y luego agregas G-418 solo sobrevivirán células con éxito transfectadas.