¿Qué es la pérdida de fluorescencia en photobleaching?

La fluorescencia surge cuando un grupo químico es excitado por una longitud de onda de luz específica y luego emite luz a una longitud de onda diferente. El fotoblanqueo ocurre cuando este grupo químico ha sido cambiado de modo que ya no fluoresce con la excitación.

La razón por la que esto sucede es que cuando la región fluorescente absorbe la energía (como fotones), entra en un estado de energía superior. En este estado, es más probable que la región sufra modificaciones, es decir, se rompa un enlace covalente o se una a otra molécula, etc.

El efecto de esto es que, con el tiempo, la población de moléculas fluorescentes en una fuente de luz disminuirá, y su fluorescencia se desvanecerá.

Se puede encontrar una buena descripción de FLIP en wikipedia y Nikon Note (pérdida de fluorescencia en photobleaching, página en nikon.com). En general, es una técnica de imágenes de fluorescencia para estudiar la dinámica de proteínas dentro de las células. Al iluminar repetidamente las regiones de interés usando un pulso de láser con potencia reducida, las imágenes se toman entre los intervalos de pulso. Típicamente, los fluoróforos se blanquean mediante una iluminación de pulso láser. Con los movimientos de las proteínas, los fluoróforos blanqueados se intercambian con los no blanqueados en las células. Uno puede luego hacer un análisis de estas imágenes demostrando los cambios de los fluoróforos para estudiar la dinámica de las células.