En primer lugar, hay algunos términos con los que debe estar familiarizado:
Transformante: una bacteria normal en la que se inserta un plásmido.
Esto es más de dos tipos:
· Transformante con recombinante: la bacteria toma el plásmido que también contiene el gen deseado
· Transformante sin recombinante: la bacteria toma el plásmido que no contiene el gen deseado
No transformante: una bacteria que no absorbe el plásmido en sí.
¿Qué antibióticos puedo usar para una tos resistente?
¿Cómo desarrolla una persona la resistencia a los antibióticos?
¿Qué sucede si tomo antibióticos con demasiada frecuencia? ¿Me vuelvo resistente a sus efectos?
Inactivación de inserción: si el gen deseado se inserta en cualquiera de los sitios resistentes a antibióticos, ese sitio se vuelve inactivo y el plásmido pierde su resistencia al antibiótico particular
Caso 1: si insertamos un GOI en uno de los dos sitios resistentes a antibióticos:
Usted tiene una bacteria que no tiene ningún plásmido.
Usted tiene un plásmido aislado que contiene 2 genes resistentes a los antibióticos, a saber, Ampicilina RG y Tetraciclina RG
Ahora inserta el GOI en el plásmido y en uno de los sitios resistentes a antibióticos, por ejemplo Tetraciclina.
Este es un proceso casual, el plásmido puede ocupar el GOI o no. Existen 3 condiciones:
R: La bacteria toma ese plásmido que contiene GOI ( Transformante con Recombinante)
B: la bacteria toma ese plásmido que no contiene GOI ( Transformante sin Recombinante)
C: la bacteria no absorbe ningún plásmido ( no transformante)
Lo ideal sería diferenciar entre el transformante como general y no transformante primero.
Tenga en cuenta que Transformant contendrá resistencia a ampicilina en sus dos subcategorías, pero el no transformante no lo hará.
Entonces, toma ABC en un petridish en un medio de cultivo y agrega Ampicillin . A y B sobrevivirán mientras C muere.
Usted ha identificado exitosamente los Transformantes.
Ahora vamos al verdadero objetivo de nuestro experimento: identificar los recombinantes / transformantes verdaderos
Dado que ha agregado el GOI a la región de tetraciclina, las bacterias que habían absorbido el plásmido con GOI ( A) perderán su resistencia a la tetraciclina debido a la inactivación por inserción. Pero la bacteria que tomó el plásmido sin GOI ( B) todavía tiene resistencia a ambos antibióticos.
Ahora, nuevamente, tome AB a un petridish y agregue tetraciclina al medio de cultivo. Como la tetraciclina es bacterio estática , no mata las colonias sino que ralentiza su crecimiento.
Ahora B continuará creciendo a un ritmo normal, mientras que A que era susceptible no lo hará. Dejará de crecer o su tasa de crecimiento será mínima, lo que facilitaría su identificación bajo el microscopio ( colonias estáticas). Marque su posición y luego extraiga A que fue el verdadero transformador.
Caso 2: GOI agregado en ambos sitios
No se pueden identificar los verdaderos transformantes ya que C y A serían ambos susceptibles a los antibióticos esta vez y, por lo tanto, uno no podrá inferir la diferencia entre los dos.
O bien, tendrá que insertar otro marcador seleccionable como Lac z o cualquier otro gen de resistencia a antibióticos o no insertar en ambos lugares.
Espero que esto ayude.
