¿Qué tan común es que las enzimas expresadas por el promotor ptac sean tóxicas para la célula huésped?

Independientemente del promotor que se use para expresar una proteína recombinante, dicha proteína extra~na puede ser muy tóxica para la célula huésped. Tal toxicidad tiende a ser dependiente de la dosis, por lo que la cantidad de proteína recombinante expresada es un factor. Si su anfitrión puede seguir dividiéndose, puede obtener una cantidad adecuada de su proteína, y todo está bien. Sin embargo, si la toxicidad ocurre a concentraciones intracelulares muy bajas, buscar un hospedador alternativo es el camino a seguir.

Por cierto, si su promotor es significativamente reprimido, la expresión de su proteína recombinante es igualmente reprimida, por lo tanto su anfitrión no está haciendo lo que usted desea.

Sí, es bastante común que las enzimas u otras proteínas sean tóxicas cuando se sobreexpresan. Puede intentar ajustar el nivel de expresión variando la cantidad de inductor, cambiando el número de copia del plásmido que está utilizando a un plásmido de número de copia inferior o variando medio de crecimiento / temperatura. Es un dolor en el cuello, sin duda, pero con la suficiente paciencia debería ser posible encontrar las condiciones para producir suficiente proteína para su (s) propósito (s) experimental (es). ¡Buena suerte! 🙂