En general, no sabemos. Recibimos pistas que pueden investigarse utilizando el conocimiento previo.
Una buena pista es cuando la enzima muestra una cinética cooperativa en extracto crudo o in vivo. Luego se purifica la enzima y se realiza un estudio de subsubstrato, refinando el medio hasta el punto donde se pueden identificar todos los sustratos potenciales y se fijan sus concentraciones para permitir la medición de cinéticas de sustrato único, bajo diferentes pH, temperatura y otras condiciones. Las pruebas de inhibición también se realizan para descubrir posibles mecanismos de reacción. La interpretación de los resultados no siempre es directa.
Aquí hay un ejemplo de lo que podría implicar un experimento de este tipo: Evidencia de la cooperación en la unión de la coenzima a Sulfolobus solfataricus alcohol deshidrogenasa tetramérica …
Consulte las referencias bibliográficas en el Enzyme Handbook. Está lleno de ejemplos de estudios de caracterización de enzimas en los que se investigan los requisitos y la especificidad de la coenzima.
