Bioquímica: ¿cómo se caracteriza la localización subcelular de los organelos de una célula?

Por lo general, la inmunofluorescencia (IF) es la forma más fácil de hacerlo.

¿Por qué? En función de lo buenas que sean sus técnicas IF y los microscopios, puede visualizar simultáneamente varios marcadores fluorescentes diferentes en la misma celda. Acomódelo con un marcador de ADN o citoesqueleto / orgánulo, y podrá ver fácilmente cómo están espaciados los diferentes orgánulos dentro de la célula y con respecto a cada uno.

Como un buen ejemplo, aquí se muestra el aspecto de varios organelos y otros componentes de células mediante IF.


Para la mayoría de estas imágenes, el núcleo está indicado en azul y los microtúbulos en rojo. Fuente: Prestige Antibodies® Desarrollado por Atlas Antibodies in Immunofluorescence Applications

Hay varios enfoques diferentes que puede tomar dependiendo de qué organelo le interese. Uno que inmediatamente aparece en mi mente es determinar la localización subcelular del núcleo, esto se hace típicamente “teñiendo” las células con una sustancia particular, en este caso DAPI. DAPI se une a las regiones AT del ADN, lo que tiñe fuertemente el núcleo. A continuación, puede obtener imágenes de sus células teñidas mediante microscopía de fluorescencia a ~ 460 nm.

Otros pocos ejemplos son el retículo endoplasmático, las mitocondrias y el aparato de Golgi, que pueden explorarse con ceramidas, esfingolípidos o proteínas / anticuerpos marcados fluorescentemente que reconocerán los objetivos específicos encontrados en estos orgánulos.

Vea esta referencia técnica de Life Technologies como una buena referencia con respecto a la segunda mitad de mi respuesta: sondas para el aparato de retículo endoplasmático y aparato de Golgi, sección 12.4

¡Aclamaciones!

Joey