Hay muchos métodos, la mayoría depende de los métodos de extracción de fenol / cloroformo, que a menudo incorporan una sal caotrópica de algún tipo. Guanidinium es común.
Reactivo Trizol TRIzol®: Life Technologies es probablemente la más confiable y la mejor opción para un reactivo de extracción generalizado. Si lo usa correctamente, puede aislar ADN, ARN y proteína (desnaturalizada) de su muestra. Me olvido de que el autor de los dos artículos está basado en: creo que los tengo en mi “libro de magia”, pero ahora estoy en casa y no me molestaré en mirar. Aquí hay una “lista de piezas” para “rodar la tuya”. Sigma es confiable pero hay fuentes para estas cosas que pueden ser más baratas e igual de buenas.
38% de fenol (fenol puro de cristales, es decir, SIGMA P1037-500G)
Tiocianato de Guanidina 0.8 M (118.16 g / mol)
Tiocianato de amonio 0.4 M (79.12 g / mol)
Acetato de sodio 0.1 M (82.03 g / mol)
5% de glicerol
Por supuesto, siga todos los procedimientos de seguridad. El cloroformo es un carcinógeno y tiende a provocar cáncer de hígado. Un amigo mío murió de cáncer de hígado cuando tenía veinte años. No sé si el cloroformo tuvo algo que ver con su trágico fallecimiento, pero usaría guantes y trabajaría en una capucha si estuviera usando.
He hecho mi propio “Trizol” cuando era un profesor de investigación muerto de hambre para ahorrar dinero que podría gastar en ayuda técnica, pero soy viejo y un bicho raro. Incluso he hecho mis propios extractos de envases de fagos, no tan bueno como storebought sin embargo. Las cosas caseras de Trizol funcionan bastante bien. Busque el protocolo de Trizol en línea en algún lugar y ya está listo para comenzar. Sin embargo, tenga en cuenta que existen otros métodos especializados para diferentes tejidos y aplicaciones, y que podrían ser mejores para sus aplicaciones específicas. Debería considerar cosas como qué tejido está extrayendo, qué tan tolerante son sus procedimientos posteriores de ADN cortado, contaminantes como ARN, cloroformo / fenol, glucógeno u otros polisacáridos, ya que algunos métodos son mejores que otros para tratar estas cuestiones. Básicamente, “Pagas tu dinero y tomas tu decisión”. ¿De qué tejido estás buscando extraer ADN?
