Para realizar terapia génica necesitas muchos equipos. Espero que sepas qué terapia genética realmente significa básicamente la introducción de un gen en un organismo.
Para ello, primero necesitarás el ADN deseado, es decir, qué personaje deseas en un organismo, como podría ser la introducción de cualquier enzima que carece en el organismo, por lo que necesitas aislar el gen que codifica esa enzima. Para aislar el ADN, primero tendrá que romper la célula para lo cual necesitará la enzima digestiva de la pared celular y luego, cuando obtenga el contenido de la célula, deberá eliminar los elementos no deseados, como el ARN, utilizando ARNasa (enzima de digestión del ARN). núcleo usando nucleasa, lípidos usando lipasas. Luego obtienes ADN y lo limpiarás con spooling. Entonces necesitarás encontrar la parte deseable del ADN usando instrumentos.
Una vez que tienes tu ADN deseable, todo lo que necesitas es un vector, probablemente un plásmido, ya que tendrás que introducir ADN en el vector porque este ADN que aislaste no puede replicarse dentro de la célula anfitriona (organismo) ya que carece del origen de la replicación pero está presente en el vector. Asegúrese de que el vector tenga al menos dos genes marcadores. Por qué es así, te lo diré más tarde. Los genes marcadores proporcionan un cierto carácter al plásmido, como es capaz de crecer en ampicilina por lo que contiene un gen marcador de resistencia ampiciliana y, si es capaz de crecer en tetraciclina, contiene un gen de resistencia a tetraciclina y si produce una luz cuando se expone a la radiación UV. contiene algún gen flourosecent.
Una vez que haya encontrado el vector que necesitará, se trata de una enzima de restricción que realiza cortes en secuencias específicas y cortará parte del vector y el ADN para que puedan ligarse utilizando la enzima ligasa.
Ahora, debido a que el vector es capaz de autoenlazarse, tendrá que dejar de usar fosfatasa alcalina porque si eso sucede, su ADN no se ligará y la terapia génica no podrá llevarse a cabo.
A pesar de la adición de fosfatasa alcalina, existen algunas posibilidades de autoligación del vector. Los eliminaremos más tarde.
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Entonces todo lo que necesita es introducir todas las células, ya sea recombinante (que contiene el vector y el ADN) y células hospedadoras no recombinantes (solo el vector) en las células del huésped (sacar algunas células del organismo en el medio de cultivo). Este proceso se llama transformación.
Además, cuando introduzcas las células, también habrá algunas células en las que nada se transforma ni en el ADN recombinante ni en el ADN no recombinante.
Ahora aquí viene el papel de los genes marcadores. Debes saber que en la introducción del ADN en un vector de su gen marcador se inactiva y se llama inactivación insercional.
Supongamos que tomas dos genes marcadores uno para ampicilina y el otro es para un poco de luz de color cuando se expone a UV y el gen UV se inactiva en ADN recombinante.
A continuación, introduzca todas las células en un medio de cultivo que contenga ampicilina y las células en las que nada se transformó se eliminarán.
A continuación, exponga las células restantes a UV. Esas células que no emiten ninguna luz las marcan y las separan, son las deseadas que contienen el vector y el ADN.
Cultive esas células y vuelva a introducirlas en el organismo y, si, ahora debería ser que las células son mortales, de modo que el carácter que desee en un organismo no sea permanente hasta que la terapia génica se lleve a cabo en la etapa embrionaria temprana.
Espero que te dé una idea de todas las cosas que necesitarás.
