La extracción de ADN es más o menos lo mismo que la extracción de cualquier otra biomolécula de las células:
Primero, debe descomponer el tejido y las células para liberar el contenido. Esto se puede hacer de varias maneras, pero hoy en día se realiza principalmente vertiendo los materiales en una sopa que contiene enzimas que rompen las proteínas estructurales, como en el tejido conectivo y las membranas celulares.
Entonces, debes asegurarte de que tu biomolécula no se dañe o destruya una vez que se haya lanzado al mundo exterior. El ADN es bastante robusto, es bicatenario, pero las hebras largas y delicadas del ADN genómico se pueden romper físicamente (o “esquilar”) y existen enzimas ADNas que masticarán el ADN no protegido. Afortunadamente, es muy fácil reducir o eliminar la actividad de ADNasa añadiendo a su sopa una molécula quelante como EDTA, que se adhiere y secuestra los cationes divalentes (como el Mg ++) que las enzimas necesitan para hacer su trabajo sucio. Entonces, solo tienes que ser razonablemente cuidadoso y puedes mantener el daño físico al mínimo.
Tenga en cuenta que solo desea ADN, las otras biomoléculas (proteínas y ARN) de las que desea deshacerse. El ARN lo podemos eliminar fácilmente: es tan peligroso fuera de su área de funcionamiento en la célula, que hay enzimas que destruyen el ARN en todas partes, pero podemos verter RNasa en nuestra sopa y calentarla durante unos minutos para estar seguros. Las proteínas y las proteínas son un poco más duras, pero podemos deshacernos de ellas de varias maneras; hoy en día, generalmente utilizamos un protocolo de precipitación de sal y temperatura fría que nos permite sacarlos de la solución para que podamos centrifugar el tubo y empaquetar las proteínas junto con los desechos celulares misceláneos en la parte inferior.
Entonces, podemos simplemente verter la sopa de ADN del gránulo y mezclarla con alcohol para eliminar el ADN de la solución. Luego podemos aislar el ADN, ya sea centrifugando con una varilla de vidrio (si es genómico), o centrifugándolo y lavando la pastilla una o dos veces para asegurarnos de que toda la “sopa” desaparezca. Un poco de aireación para eliminar el alcohol, y podemos resuspender el ADN en una solución tampón protectora o incluso en agua pura.
