La microscopía de fluorescencia se usa principalmente debido al gran contraste que proporciona.
En el microscopio de luz normal, ves todo … ¡lo que significa que también ves lo que no te interesa! Una imagen de microscopía de luz normal no es terriblemente informativa. Es como un bosque, en el que intentas mirar árboles individuales …
Ya en el microscopio de luz normal, uno típicamente usa tintes para colorear las características particulares de la muestra. Esto ayuda mucho, pero los tintes generalmente no son muy específicos, y todavía ves el resto también. Obtiene una imagen gris de las celdas, con algunas características coloreadas.
En fluorescencia, solo ve el tinte fluorescente que está buscando, y nada más . En realidad obtienes una imagen con un fondo negro. Eso ofrece un mejor contraste y, por lo tanto, mejores detalles sobre lo que estás buscando.
Más importante aún, somos capaces de diseñar genéticamente células, para codificar colorantes fluorescentes en los genes de proteínas específicas. Esto significa que tiene una especificidad perfecta de 1: 1 para la proteína que le interesa. Solo verá que esa proteína en particular se ilumina y nada más. Aún mejor, usted sabe que ha coloreado todas y cada una de las moléculas de estas proteínas, y no ha dejado fuera algunas que su agente colorante no pudo alcanzar.
La ingeniería genética es lo que realmente hace que el microscopio de fluorescencia sea tan increíblemente poderoso. De las miles de proteínas, puede colorear exactamente un tipo específico, y ver dónde está en la celda, y hacia dónde va, sin señales de fondo de los demás. Esta ingeniería genética es hoy en día muy fácil en microscopía. Obtener semejante especificidad y contraste es casi imposible de lograr con otras técnicas de microscopía.
