Claro, fácil como un pastel! Este es el tipo de cosa que, de hecho, es tan fácil que la mayoría de la gente no tiene un protocolo escrito para ello, que es probablemente la razón por la que está luchando por encontrar uno. 🙂
Para la mayoría de las cepas bacterianas – mi experiencia es con E. coli , principalmente – hay algunas especies donde las reservas de glicerol no funcionan tan bien, pero debes consultar con alguien que trabaje con tu especie de interés, para averiguar qué funciona mejor para ellos .
Para E. coli , use un cultivo de una noche (crecido bajo las condiciones correctas, generalmente será LB con cualquier antibiótico necesario a 37 ° C, pero puede variar según los requisitos de crecimiento de su cepa) o unos cuantos bucles de células bacterianas tomadas de un plato recién cultivado. Agregue glicerol: está buscando una concentración final de glicerol de ~ 20% (por lo que la cantidad que agregue dependerá de sus volúmenes y de la concentración inicial de glicerol). Use una buena técnica aséptica. Asegúrese de que sus células estén en una criotubo y etiquetado correctamente – pop en el congelador -80c. Asegúrese de tener un registro claro de cuál es el genotipo de su cepa y dónde se almacena.
Para recuperar las células de este material congelado, saque el tubo del congelador, ábralo y toque un palillo de dientes, circuito o punta de pipeta estéril con la masa congelada de las células. Intenta juntar suficientes células para que puedas ver un poco de material en la punta de tu dispositivo inoculante, pero incluso si no puedes verlo, es probable que tengas células más que suficientes. Nuevamente usando una técnica aséptica, inocula el medio de cultivo apropiado con tus células. Evite el congelamiento / descongelamiento excesivo del tubo de almacenamiento; debe entrar y salir directamente del congelador a -80 ° C sin tiempo para comenzar a descongelar.
