¿Se pueden renaturalizar las proteínas desnaturalizadas en SDS-PAGE?

Muchas proteínas pequeñas pueden renaturalizarse después de SDS-PAGE. Por proteína pequeña me refiero a una que tiene un solo dominio de plegado.

No debe contar con que su proteína sea capaz de replegarse. Si puede usar SDS para desnaturalizar la proteína en solución y luego encontrar un conjunto de condiciones para volver a plegar la proteína, hay muchas posibilidades de que pueda adaptar el mismo protocolo para renaturalizar la proteína después de SDS-PAGE. Es casi seguro que necesitará extraer la proteína del gel primero.

Las proteínas más grandes son mucho más difíciles de desnaturalizar de forma reversible. A medida que aumenta la longitud de la proteína, el número que puede desnaturalizarse de forma reversible cae en picado. Si una proteína particular puede replegarse después de la desnaturalización de SDS, entonces tienes una posibilidad de luchar.

Probablemente sería mejor usar PÁGINA nativa en lugar de la página SDS. Deberá considerar la carga nativa de su proteína de interés al pH del tampón de ejecución que decida usar, pero tendrá muchas más posibilidades de recuperar la proteína activa.

Sí, pero las posibilidades de que las proteínas se adapten a su estado nativo, y que permanezcan funcionales, son inversamente proporcionales a la longitud de la proteína, y este problema se agrava si la proteína tiene una modificación postraduccional significativa.

No … en general no. Hay demasiadas interrupciones de carga, y una vez que las porciones hidrofóbicas de una proteína están expuestas, se aparearán entre sí en lugar de replegarse adecuadamente. La mayoría de las proteínas no renaturalizan bien después de haber sido desnaturalizadas.

Es posible en ciertos casos y la actividad de la proteína después de la renaturalización no es posible en casi todos los renaturalizados. La elución, la precipitación y la separación en sí misma requieren otro procedimiento prolongado y la proteína que se pliega una vez desnaturalizada no puede retirarse y estar activa.