Al hacer un experimento para identificar las proteínas por especificación de masas, ¿qué tan grande debe ser el volumen de la muestra?

[Si bien me siento halagado de que la gente solicite mi opinión sobre estos temas, debo decir que la proteómica es compleja en extremo. Así que mientras haré todo lo posible para señalarte en la dirección general correcta. Por favor, comprenda que simplemente no es logísticamente posible responder la mayoría de las preguntas en este campo de estudio de forma exhaustiva en este tipo de foro.]

Dicho eso, lo mejor que puedo decir es que depende principalmente de la configuración de la cromatografía, que está principalmente impulsada por las necesidades del espectrómetro de masas para aislar e identificar la proteína diana.

El análisis de proteínas comúnmente requiere técnicas de “nano LC” o “LC capilar” para aislar e identificar mejor la proteína diana (Google “deconvolución de proteína” si desea que su cabeza explote). Entonces, con esos métodos, estará más preocupado por la tasa de inyección que por el volumen. El volumen solo necesita ser adecuado para mantener la inyección a la velocidad prescrita durante el tiempo que necesite completar la ejecución. Una velocidad de inyección razonable para nanoLC es algo así como 500nL / min. Un tiempo de ejecución razonable podría ser de 30 minutos, por lo que obtendría algo así como 15μL.

Para obtener más información, aquí hay un gran ejemplo de un estudio de proteínas con una descripción completa de la preparación de la muestra, la configuración del instrumento y el procedimiento de análisis (PDF):
Página en phas.ubc.ca

Si observa un lisado eucariota de células enteras, es bastante típico que el laboratorio MS cargue 1 ug de proteína total en una columna nano LC. Un automuestreador nano típico combinado con una trampa / configuración analítica con ventilación puede inyectar hasta 10 ul de muestra y cargarla en la columna de trampa en un tiempo razonable. Por lo tanto, debe apuntar a una concentración mínima de 100 ug / ml y suministrar al laboratorio de EM con al menos 25 ul de muestra para permitir al menos una reinyección. Las inyecciones triplicadas son razonablemente comunes, por lo que es posible que desee planificar el suministro de 40-50 ul en ese caso. Si su concentración es superior a 100 ug / ml, puede suministrar volúmenes proporcionalmente más bajos. Si su mezcla es menos compleja que un lisado eucariota (IP desplegable, banda de gel, proteína purificada, etc.), entonces puede suministrar cantidades totales aún más bajas porque la señal a través del sistema analítico se concentra en menos componentes.