¿Hay diferentes tipos de enzimas polimerasa Taq?

La polimerasa Taq, derivada de la bacteria termófila T hermus aquaticus , es solo una de varias polimerasas utilizadas en la PCR. Taq tiene una baja fidelidad, por lo que su uso ha quedado relegado a reacciones en las que realmente solo desea ver si obtiene un producto, en lugar de reacciones en las que desea conservar el producto. La mayoría de las polimerasas disponibles en el mercado se derivan de especies con polimerasas de corrección (como Pyrococcus furiosus ).

Hacer Taq (y algunas otras polimerasas) es increíblemente fácil: obtenga una construcción de expresión que le permitirá hacer su polimerasa en E. coli , abrir las células y calentar el lisado a temperaturas relativamente altas. La mayoría de las proteínas de E. coli son inestables a altas temperaturas y se caen de la solución, mientras que la polimerasa termófila es perfectamente feliz. Si derriba sus lisados ​​tratados térmicamente, la polimerasa permanece en el sobrenadante y casi todo lo demás en gránulos.

Sí, hay diferentes tipos si la polimerasa taq, como la taq de inicio en caliente (requiere altas temperaturas para la activación) y la taq recombinante que se produce al expresar la proteína recombinante en E. coli.

Sí. La mayoría de las ADN polimerasas comerciales ya no son de Taq y muchas se modifican. Y sí, puedes purificar el tuyo. Sé de laboratorios que hacen esto.