¿Cuál es el procedimiento correcto para determinar el peso molecular de las proteínas mediante cromatografía de filtración en gel?

Primero tiene que estandarizar su sistema. Hay muchos tipos de columnas, algunas tienen un rango estrecho para mayor precisión y otras tienen una distribución muy amplia para dar una figura de peso molecular del parque de bolas. A continuación, elige unas pocas proteínas estándar o estándares de poliestireno con peso molecular conocido y establece su curva de calibración.

El mismo principio se aplica ya sea una proteína o un polímero.

Después, inyectas tu proteína de interés y el tiempo de eliración te dará el peso molecular.

La cromatografía de filtración en gel, conocida como cromatografía de exclusión por tamaño, separa las proteínas en función de sus tamaños. Yo trabajo en un laboratorio de bioquímica. Primero ejecutamos un ‘estándar’ que es una mezcla de proteínas conocidas en la columna. Trazamos un gráfico XY del peso molecular de la proteína (transformada en una escala logarítmica) v / s volumen de eluyente (el volumen al que esa proteína específica eluye fuera de la columna). Esto le da una curva lineal estándar.

Aquí hay un ejemplo de una curva estándar que hice para mi columna. Debe hacer una curva para su propio sistema antes de comenzar la purificación de proteínas. Una vez que ha trazado esta curva lineal determinada experimentalmente, puede usar su ecuación para determinar el peso molecular de una proteína desconocida en función del volumen (reemplace “x” en su ecuación con ese volumen) a la que sale.

Alternativamente, puede determinar el peso molecular de la proteína usando SDS-PAGE. Pero SDS-PAGE es una técnica no relacionada, también ampliamente utilizada en laboratorios con fines analíticos.

Empapándolos en soluciones anuladas de coumaryl-etileno