Las pruebas para endotoxinas bacterianas se realizan comúnmente en la industria mediante tres metodologías diferentes: técnica de coágulo de gel, técnica turbidimétrica y técnica cromogénica.
La técnica de gel-coágulo se basa en la coagulación del reactivo lisado que tiene lugar en presencia de endotoxinas. La sensibilidad del reactivo lisado puede definirse como la cantidad mínima de endotoxinas requerida para producir el reactivo de coagulación. En función de la sensibilidad, las endotoxinas bacterianas se pueden cuantificar.
La técnica turbidimétrica es un ensayo fotométrico y la cuantificación se realiza como una correlación entre la turbidez del reactivo y la presencia de endotoxinas. El método turbidimétrico se puede clasificar además en i. ensayo de punto final y ii. ensayo cinético El ensayo del punto final se emplea cuando las endotoxinas se cuantifican al final del período de incubación en función de la turbidez del reactivo. Mientras que el ensayo cinético es cuando las endotoxinas se cuantifican en función del tiempo requerido para alcanzar una tasa / nivel establecido de turbidez o absorbancia del reactivo.
La técnica cromogénica mide los cromóforos liberados de un péptido cromogénico tras la reacción del reactivo lisado y las endotoxinas. Similar a turbidimétrico, hay dos categorías de técnica cromogénica: punto final y cinética. El punto final cuantifica la concentración de endotoxinas en función de los cromóforos liberados al final del tiempo de reacción / incubación. Mientras que cinética implica medir el tiempo requerido para alcanzar un desarrollo de color establecido o la absorbancia de la mezcla de reacción.
Referencias
1. Capítulo General de la Farmacopea de EE. UU. Prueba de endotoxinas bacterianas http://www.usp.org/sites/default…
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¿Por qué una columna de filtración en gel puede ponerse marrón (como una Superdex 70)?
2. Guía de la FDA de EE. UU. Para la industria: Guía de prueba de pirógenos y endotoxinas para la industria: prueba de pirógenos y endotoxinas: preguntas y respuestas
La prueba de endotoxina LAL se refiere a los mismos métodos empleados anteriormente. LAL significa Limulus Amebocyte Lysate (referido como “Lisado” en la respuesta anterior) es un extracto de células sanguíneas de un cangrejo herradura. LAL reacciona con las endotoxinas bacterianas para provocar las reacciones mencionadas anteriormente.
