El ensayo BCA y el ensayo Bradford son algunas de las opciones más simples, pero obviamente requieren acceso de algún tipo a estos reactivos y / o una especificación. Para obtener cualquier tipo de buena respuesta, necesitarás enfocarte de esta manera. ¿Tiene algún amigo en una universidad, o tal vez podría visitar uno cercano, hablar con alguien en el departamento de química / bioquímica y preguntar si es posible que alguien lo ayude a utilizar una especificación? A la mayoría de los profesores les parece genial que un alumno de secundaria desee realizar un experimento y estaría feliz de ayudarlo un poco, o hacer que uno de sus alumnos lo haga.
Si tiene acceso a geles de proteínas, también puede cuantificar mediante la ejecución de diluciones en serie de sus proteínas en diferentes pocillos, junto con diluciones idénticas de un estándar conocido (por ejemplo, BSA – albúmina de suero bovino, bastante barato). A continuación, puede teñir el gel con algo (idealmente, tintes Sypro, pero Coomassie podría funcionar lo suficientemente bien para lo que está tratando de hacer), tomar la mejor fotografía posible y cuantificar la intensidad de las bandas, en relación con el estándar.
Lo más fácil que puedo pensar que hagas, que aún requiere Coomassie y un estándar conocido, sería tomar un papel Whatman (papel de filtro) y secarlo con pequeñas cantidades (~ 5 ul) de diluciones en serie de tus proteínas (por ejemplo, 1 : 2, 1: 4, 1: 8, 1:16, 1:32). Deje que se seque por unos minutos, luego coloque en Coumassie por un par de minutos. Vierta todo el tinte, enjuague un par de veces con agua y déjelo reposar durante el tiempo que sea necesario para que la mayor parte del tinte de fondo se elimine del papel. Luego puede tomar la mejor imagen de calidad del “dot blot” como sea posible, y luego tratar de cuantificar la intensidad de los puntos (ImageJ es un programa gratuito que lo ayudaría a hacer esto). Por lo tanto, puede desarrollar una curva estándar de intensidad frente a concentración, usando la concentración de proteína conocida, y luego usar la ecuación para esa curva para determinar la concentración de su desconocido. Sin embargo, esto no será muy cuantitativo. Y sus conocidos y desconocidos deberán estar en el mismo documento y tratados de forma idéntica para que puedan compararse / cuantificarse de forma razonable de esta manera.
