la administración de estimulantes químicos a las células ES depende de las células deseadas después de la diferenciación
por ejemplo, las células ES humanas se pueden diferenciar en miocitos con propiedades estructurales y funcionales de cardiomiocitos. Se cultivaron células ES indiferenciadas humanas del clon de célula única H9.2 (14) en una capa de alimentación de MEF mitomicina inactivada (mitomicina C) en medio de cultivo como se describe previamente (10). El medio de cultivo consistió en 80% de DMEM (formulación de no piruvato, alta en glucosa; Life Technologies Inc., Rockville, Maryland, EE. UU.) Suplementado con FBS al 20% (HyClone, Logan, Utah, EE. UU.), 1 mM de glutamina , Mercaptoetanol 0,1 mM y stock de aminoácidos no esenciales al 1% (todos de Life Technologies Inc.).
Para inducir la diferenciación, las células ES se dispersaron en pequeños grupos (de tres a 20 células) usando colagenasa IV (Life Technologies Inc., 1 mg / ml durante 20 minutos). Las células se transfirieron entonces a placas de Petri de plástico (Miniplast, Ein Shemer, Israel), a una densidad celular de aproximadamente 5×106 células en un plato de 58 mm, donde se cultivaron en suspensión durante 7-10 días. Durante esta etapa, las células se agregaron para formar EB, que luego se sembraron en placas de cultivo revestidas con gelatina al 0,1%, a una densidad de uno a cinco EB en un pocillo de 1,91 cm2, y se observaron microscópicamente la aparición de contracciones espontáneas.
Etapas en la producción y diferenciación de EB. ( a ) Esquema de las tres etapas en la diferenciación de células ES humanas. Inicialmente, las colonias ES se cultivan en la parte superior de la capa de alimentación MEF (izquierda). Para inducir la diferenciación, las células se transfieren a suspensión, donde se agregan para formar EB (centro). Después de 10 días en suspensión, los EB se colocan en placas de cultivo recubiertas de gelatina, donde se observan las contracciones espontáneas (derecha). ( b ) Fotomicrografías que representan las tres etapas mencionadas: colonia ES (izquierda), EB en suspensión (centro) y un área de contracción en la extensión en una EB (derecha, flecha).
para información adicional: las células madre embrionarias humanas pueden diferenciarse en miocitos con propiedades estructurales y funcionales de los cardiomiocitos
