Lo usamos todo el tiempo para hacer bibliotecas de cDNA o clonar genes de eucariotas.
Los genes eucariotas son más difíciles de clonar que los genes procarióticos porque los eucariotas tienen intrones y elementos no codificantes en sus genomas. Mientras que simplemente puede PCR un gen de bacterias, es imposible en eucariotas ya que los intrones pueden tener decenas de miles de pares de bases de largo. La célula tiene maquinaria (empalme de ARN) para eliminar los intrones cuando se expresan estos genes, y el transcrito de ARN solo contiene los exones. Si queremos clonar ese gen para estudiarlo más a fondo, solo queremos los exones y no los intrones. Por lo tanto, dejamos que la célula haga todo el trabajo en el corte y empalme de los intrones, y tomamos la transcripción de ARN, usamos la transcriptasa inversa para hacer un clon de ADNc, que solo contiene exones. Podemos clonar eso en lo que queramos y expresarlo en otros organismos (es decir, E. coli ) que carecen de mecanismos de empalme.
También podemos usarlo para estudiar la expresión génica. Los niveles de ARN están en su mayor parte relacionados directamente con la forma en que se expresa un gen. Sin embargo, es difícil cuantificar el ARN espectrofotométricamente (¿cómo se separa el gen de interés)?), O incluso en un gel (hace un frotis gigante). Entonces, usamos transcriptasa inversa con un cebador específico de gen que solo amplificará inversamente su gen de interés. Luego normalizas tu ADNc y lo aplicas en un gel (con tus controles) para ver los cambios en la expresión y el empalme de ARN en respuesta a estímulos (es decir, eliminación de ARNi, modificaciones del promotor, morfolinos, etc.).
