Cómo cultivar células de mamíferos

Hay una serie de pasos rigurosos que debe seguir para cultivar células de mamíferos y esto debe realizarse en una campana en un laboratorio de cultivo de tejidos. Debes asegurarte de que estás usando guantes y una bata de laboratorio durante todo el proceso. En primer lugar, sus células deben tratarse con 5ml de tripsina (el mismo volumen que el líquido que ya se encuentra en el interior) para liberarlos de la superficie interna del contenedor en el que se encuentran. Una vez que esto ocurra, verifique con un microscopio que el procedimiento trabajó. Luego retire todo el contenido en un tubo de tamaño apropiado. Luego debe comenzar el proceso de centrifugación, de modo que las células se congreguen en el fondo del tubo. Esto debería tener lugar durante 5 minutos a 1000 rpm. Después de esto, debe verter cuidadosamente el líquido para que solo queden las células. Luego, agregue 10 ml de medio de Eagle modificado de Dulbecco (DMEM) a las células y mezcle bien con una pipeta. Dependiendo del día en que esté cultivando (normalmente debe hacerse el lunes y el viernes), se determinará cuánto DMEM puro agregar al nuevo contenedor que usará para incubar las células y el líquido que contiene las células. Por ejemplo, si el proceso ocurriera en un viernes, la relación sería 1/3, es decir, 3 partes de DMEM puro a 1 parte de cultivo celular. Antes de que las células se incuben a 37 ° C, asegúrese de que se verifiquen con un microscopio para asegurarse de que se vean ilesas, que están allí y que ha realizado el proceso correctamente.