¿Cómo se fabrican los anticuerpos que se usan en ELISA? ¿Cuáles son los pasos involucrados?

Básicamente, hay dos formas de generar un suministro de anticuerpos (Abs): in vivo e in vitro.

El proceso in vivo ha sido conocido y utilizado durante aproximadamente 100 años, y el proceso es análogo a recibir una vacuna. Cuando recibe una vacuna, le están inoculando antígenos específicos de un virus o bacteria en particular. Los antígenos son proteínas o glicoproteínas específicas de un virus en particular, que provocan una respuesta inmune en el huésped. Parte de la respuesta inmune es la generación de células B productoras de anticuerpos (células plasmáticas).

Los métodos de producción de anticuerpos pueden dividirse en dos categorías principales: producción in vitro y producción in vivo. Existen varias técnicas para la producción de anticuerpos in vitro, incluido el uso de cultivos de células estáticas y el uso de biorreactores. La producción in vitro ofrece la ventaja de la producción a gran escala en poco tiempo; además, los anticuerpos producidos por este método se purifican fácilmente. Sin embargo, la producción de anticuerpos in vitro tiene varias desventajas, incluida la incapacidad de crear anticuerpos glucosilados (Marx et al, 1997). Los métodos in vivo, por otro lado, son capaces de producir anticuerpos en alta concentración; además, el modelo animal ofrece la ventaja de permitir modificaciones postraduccionales como glicosilación. La principal desventaja es el uso de animales, que puede ser costoso e implica varias preocupaciones bioéticas “.
Producción de anticuerpos in vitro e in vivo | Producción de anticuerpos

Entonces, para levantar anticuerpos contra un antígeno dado, in vivo, se inyecta el antígeno en el torrente sanguíneo de un animal, generalmente ratones, conejos u ovejas. Espere 2 semanas mientras la naturaleza sigue su curso y la sangre del animal se combina con anticuerpos, extrae sangre y luego la extrae y purifica en columnas de intercambio. Los Abs generados de esta manera se llaman policlonales. Todos ellos se unen al mismo antígeno, pero a diferentes superficies o “epítopes” en la molécula antigénica.

El método in vitro genera Abs monoclonal (mAbs), lo que significa que todos los Abs son molecularmente idénticos ya que todos son producidos por hijas (clones) de la misma célula B. Este método fue inventado en 1975 por Kohler y Milstein, por el cual obtuvieron el Premio Nobel de Fisiología o Medicina en 1984. Este método requiere fusionar una célula B productora de Ab con una célula cancerígena de mieloma, generando una colonia inmortalizada de mAb que produce “células”. máquinas, “que se cultivan en la cultura. Esto se llama “tecnología de hybidoma”. Ver: tecnología de hibridoma – Wikipedia

Aquí hay una guía sobre ambos métodos: http: // ttp: //neobiolab.com/research/in-vitro-and-in-vivo-production-of-antibodies