Si se utiliza la página SDS, ¿la carga en todas las proteínas será la misma?

No.

La SDS agrega una carga negativa consistente y algo abrumadora a la proteína, a una tasa de -2 por molécula de SDS. Como normalmente hay ~ 1.4 g de SDS por 1 g de capacidad de unión a proteínas, puede imaginarse cuán fuerte es este efecto.

Sin embargo, la carga global de la proteína unida a SDS también dependerá de otros factores, que incluyen:

  • la carga de residuos originales en la cadena de proteínas. Una proteína con muchos residuos básicos (principalmente lis y arg) probablemente terminará con una carga global menos negativa que una proteína con más residuos ácidos (asp y glu).
  • la cantidad de SDS que se puede unir Por ejemplo, con las proteínas de membrana, se ha estimado que tanto como 4,5 g de SDS se unirán a 1 g de proteína.

A los efectos de SDS-PAGE, nunca debería importar realmente, pero si se combina con otras técnicas, podría ser más importante saberlo.

Sí … más o menos. SDS cubre la proteína y le da una carga negativa general. En ausencia de SDS, las proteínas tendrán su carga nativa, que podría ser positiva, negativa o neutra, y en condiciones nativas no necesariamente migrarían en el gel.

SDS crea una relación de carga a masa constante, lo que significa que puede separar las proteínas por tamaño en un entorno cargado. Si las relaciones carga a masa no fueran equivalentes, la migración a través del gel sería una función de la masa y la carga. En presencia de SDS, la migración a través de la matriz de gel es una función de la masa … principalmente.