¿Cuál es el mejor buffer y procedimiento para usar para verificar si las mitocondrias in vitro están funcionando?

La pregunta puede escribirse con más detalle. Pero por ahora supongo que al funcionar, uno significa probar la actividad respiratoria. El siguiente es el procedimiento que se desarrolló en el laboratorio actual en el que trabajo y lo usamos rutinariamente:
Aislamiento de orgánulos: mitocondrias funcionales de hígado de ratón, músculo y filroplastos cultivados

Quizás pueda responder en detalle si la pregunta puede escribirse en detalle también 🙂

Pruebe con un tampón de suspensión celular simple (particularmente uno que contenga piruvato, un sustrato para las mitocondrias), agregue tetrametilbenzadina (TMB) a la suspensión, espere unos momentos y luego detenga la reacción con un ácido.

Si las mitocondrias están funcionando, producirán radicales libres, TMB aceptará estos electrones y cambiará el color en proporción a la cantidad de radicales libres generados. Esto puede usarse como una variable instrumental para la actividad mitocondrial.