La mayoría de los anticuerpos que encuentro se pueden usar indistintamente para diferentes técnicas de detección. Sin embargo, hay algunos anticuerpos que se pueden usar específicamente para ciertas técnicas.
Algunas de las razones por las que puedo pensar son las siguientes:
- Afinidad de unión. La cantidad de anticuerpos que se agregan puede diferir enormemente entre técnicas. Por lo tanto, si la afinidad de unión de un anticuerpo es baja, probablemente necesitarías más anticuerpos. El volumen total de anticuerpos que necesita agregar luego, a su vez, se convierte en un factor limitante.
- Conjugación de anticuerpo a fluroforo. Dependiendo de su método de detección, puede necesitar que el anticuerpo se conjugue con un fluroforo o que use un anticuerpo secundario para la detección. Puede haber problemas de unión física como el bloqueo de otros anticuerpos y, por lo tanto, la restricción (esta razón es bastante vaga ya que tiene que ver con espacios físicos, que se reducen al nivel molecular, por lo tanto, no se considera un problema )
- El epítopo que el anticuerpo reconoce. A puede ser grande o pequeño. Pero en general, dependiendo de su técnica, la proteína puede estar en su estado nativo (plegado) o desnaturalizado. Por lo tanto, el epítopo importa. Si el anticuerpo solo reconoce el epítopo que se encuentra en la superficie de la proteína plegada, en condiciones de desnaturalización, el anticuerpo no funcionará y viceversa.
- Condiciones experimentales. Al igual que en el punto 3, dependiendo de las condiciones de la técnica utilizada, por ejemplo, pH o niveles de sal, la unión de algunos anticuerpos se verá afectada y, por lo tanto, dificultará la detección.
En general, verifique las especificaciones técnicas de la proteína y cumpla con lo que recomiendan los fabricantes. Esto aumentará las posibilidades de una detección exitosa de la proteína de interés que está buscando. Si no es así, en lugar de solucionar problemas, es mejor que te cambies a otro anticuerpo para ahorrar tiempo.
