Tienes dos opciones básicas: puedes aumentar los anticuerpos (Abs) contra tu proteína de interés en animales de laboratorio: ratones, conejos u ovejas son opciones comunes. Para ello, inocular a los animales de laboratorio con la proteína antigénica que le interesa estudiar para generar una respuesta inmune humoral. Al hacer esto, levantarás Abs policlonales, lo que significa que habrá muchos anticuerpos pero no serán idénticos. Los policlonales contra una proteína específica pueden unirse a muchas ubicaciones diferentes (epítopos antigénicos) en la misma proteína, lo que tiene la ventaja de proporcionar una señal de detección fuerte. Un inconveniente podría ser la reactividad cruzada con dominios de proteínas similares.
Sospecho que la gran mayoría de la identificación de proteínas, sin embargo, se realiza mediante anticuerpos monoclonales (mAbs) que puede comprar en línea con alta especificidad y ya está “validada” para unir su proteína de interés. Los mAb son producidos por tecnología de hibridoma, que ganó el premio Nobel de Medicina en 1984 para los inversores en el método. Así es como se hace: tecnología de hibridoma – Wikipedia
Aquí hay un esquema de búsqueda de la proteína C-myc a partir de un lisado celular:
También tiene la opción de utilizar Abs primario etiquetado (más caro, menos trabajo), que tienen una molécula fluorescente unida a ellos para la visualización por láser, como en un citómetro de flujo. O uno puede etiquetar su Ab primario con un Ab secundario fluorescente o radiomarcado contra el primario. Esto generalmente se hace por especie, ya que los Abs ratón-anti-conejo se unirán a cualquier conejo Ab para marcarlo. Usar Abs secundario es menos costoso pero requiere más tiempo. Para aplicar el método de tinción secundaria al diagrama anterior, necesitaría un anticuerpo primario anti C-myc, por ejemplo, anticuerpos monoclonales antihumanos de ratón, y algunos anticuerpos anti ratón de oveja con una etiqueta fluorescente de molécula o “fluroforo”.
Ver: Etiquetado de proteínas versátil en células con proteína fluorescente dividida
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