¿Cuáles son algunas ventajas y limitaciones del uso de Western blot (inmunoblot) para la detección de proteínas?

Con un western blot, no solo puede aumentar enormemente la sensibilidad de su análisis (lo que le permite detectar ~ 10 x concentraciones más bajas de su proteína), sino que también detecta solo su proteína de preferencia, ignorando cualquier proteína no relevante .

Estas ventajas son enormes ya que proporciona un sistema de detección mucho más poderoso y también le da confianza de que lo que está viendo es en realidad su proteína objetivo. Esto es esencial para ciertos ensayos in vivo .

Sin embargo, esto depende de la calidad de tu anticuerpo. Los anticuerpos débiles pueden no aumentar mucho la sensibilidad en absoluto, y los anticuerpos policlonales también pueden revelar proteínas no diana (en oposición a mono-clonales: consulte la página en sigmaaldrich.com).

Además, las transferencias Western son más caras (costos de anticuerpos, más membrana, reactivos y equipo de visualización) y consumen mucho más tiempo (~ 2 días en lugar de ~ 2 horas).

Además, hablando de una experiencia amarga, las transferencias Western tienen muchas más probabilidades de fallar, ya que hay muchos más pasos que solo manchar un gel con, por ejemplo, azul Coomassie.

Editar – solo bromeando sobre la amargura, ¡los amo realmente!