¿Cuál es el mejor método cromatográfico para separar una proteína que se une fuertemente a su sustrato?

La cromatografía de afinidad es la más adecuada para separar las proteínas que se unen fuertemente a su sustrato.

La cromatografía de afinidad es un método de separación de mezclas bioquímicas basado en una interacción altamente específica entre antígeno y anticuerpo, enzima y sustrato, o receptor y ligando. Es un tipo de técnica de laboratorio cromatográfica utilizada para purificar moléculas biológicas dentro de una mezcla mediante la explotación de propiedades moleculares.

Las macromoléculas biológicas, como las enzimas y otras proteínas, interactúan con otras moléculas con alta especificidad a través de varios tipos diferentes de enlaces e interacción. Tales interacciones incluyen enlaces de hidrógeno, interacción iónica, puentes disulfuro, interacción hidrofóbica y más. La alta selectividad de la cromatografía de afinidad se produce al permitir que la molécula deseada interactúe con la fase estacionaria y se una a la columna para separarla del material no deseado que no interactuará y eluirá primero.

Si se refiere a separar la proteína de su sustrato sin desnaturalizar la proteína, la mejor opción es usar HPLC en condiciones relativamente duras (alta temperatura y alta concentración de desnaturalizante). necesitarías valorar tanto la temperatura como el desnaturalizante para determinar qué tan alto puedes llegar sin desnaturalizar la proteína.

Si desea separar esta proteína de otras proteínas, es mucho más fácil. Use una columna de afinidad.

La cromatografía de afinidad puede satisfacer la demanda. Se basa en la fuerte afinidad de una proteína hacia un sustrato perticular. Gracias.