¿Por qué en la centrifugación en gradiente de sacarosa, las moléculas grandes están en el fondo del tubo y no en la capa superior?

Tamaño y densidad

Las moléculas más grandes se ven más afectadas por la fuerza centrípeta durante la centrifugación, pero el efecto principal aquí es la velocidad a la que se moverá la molécula (es decir, las moléculas más grandes se separarán más rápido que las pequeñas). Este es el principal impulsor en la centrifugación por sedimentación.

En la centrifugación por densidad, los objetos eventualmente estarán sujetos a flotación, por lo que las moléculas “flotarán” en la región donde su densidad coincide con la densidad del amortiguador. Entonces una molécula con una densidad de 1.1 terminará en el% de sacarosa que tiene una densidad de 1.1 (lo siento, no tengo esas tablas memorizadas).

Esto es muy básico. Si desea más información, Beckman-Coulter tiene excelentes recursos.

Realmente no lo sé, pero creo que podría ser porque las moléculas grandes generalmente están hechas principalmente de proteínas. Esto los hace muy denso. La centrifugación diferencial depende de la densidad, no del tamaño. Las partículas más grandes pero menos densas flotarían sobre las partículas más densas y más pequeñas.