¿Cuáles son los errores más comunes en la técnica de pipeteo?

Otros han cubierto micropipetas. Déjame cubrir las pipetas graduadas y las pipetas volumétricas (ya conoces esas cosas de vidrio). Oh sí, puedes cometer errores cuando los usas también.

Editar: el ítem 1 de la lista ha sido corregido en base a alguna educación valiosa del usuario de Quora.

1. Lo primero es saber si la última gota en su pipeta debe volarse o no. Algunas pipetas se designan como TD (para entregar) otras se designan como TC (para contener). En una pipeta TD, la última gota no debe ser sacudida o “volada”. Estas pipetas están calibradas para entregar el volumen correcto de líquido sin tener que soplarlo. En una pipeta TC, las pipetas están calibradas para contener el volumen correcto. En este caso, la última gota debe volarse. Muchas pipetas serológicas son pipetas TC y la última gota debe volarse. Estas pipetas están marcadas con 2 anillos en la parte superior de la pipeta.
(PD: mencioné “soplar”, pero las pipetas bucales se han eliminado en la mayoría de los laboratorios, por lo que el equivalente sería usar el bulbo o el aspirador mecánico para eliminar la última gota).

2. Errores de Parallax: esto es común entre los estudiantes cuando se leen pipetas y buretas. La pipeta debe mantenerse hasta el nivel de los ojos, o el operador debe doblarse de manera segura para leer la pipeta a la altura de los ojos. La lectura “vaga” de las pipetas puede provocar grandes cambios en los volúmenes de pipeta.

3. El enigma del menisco. – Por alguna razón, esto parece confundir a la gente. Pero la forma más sencilla de hacerlo es, si puede ver el menisco inferior, entonces use eso. Si no puede ver el menisco inferior, lea el menisco superior. No adivine dónde podría estar el menisco inferior. La confusión surge de las instrucciones que he escuchado que algunas personas repiten: “Use el menisco inferior para líquidos claros y el menisco superior para líquidos coloreados”. La instrucción es engañosa cuando usa líquidos de color claro donde el menisco inferior es visible. Todas las pipetas están calibradas para el menisco inferior, así que úselas siempre que pueda verlas. Si la solución es muy oscura u opaca en la medida en que el menisco inferior no sea visible, solo entonces use el menisco superior. En el caso de líquidos como el mercurio que forman un menisco convexo, use la parte superior del menisco convexo.

4. Usando el tamaño correcto de las pipetas: a menudo veo a los estudiantes usar una pipeta graduada de 10 ml para medir 1 ml de líquido cuando hay una pipeta de 2 ml perfectamente utilizable disponible para su uso. Sus medidas serán más precisas y precisas cuando use el tamaño apropiado de pipeta.

5. Por último, no asuma la compatibilidad química de su pipeta. La siguiente pipeta se usó para pipetear cloroformo. Es una pipeta de vidrio, debería estar bien ¿no? Piensa otra vez…

Tuve que lidiar con muestras de submicroliter PCR de ADN ambiental, que era muy irritante. Lo principal es centrarse más en las diluciones y el uso de proporciones. Duplique las cosas para que no se quede atascado con el líquido restante en la punta.

Disperse líquido lentamente y asegúrese de mezclar bien la mezcla si desea consistencia entre las repeticiones. Esto también ayuda a enjuagar cualquier residuo microscópico dentro de la punta. Eso puede requerir “desperdiciar” un consejo más grande, pero vale la pena. Además, demasiadas personas inclinan la pipeta a pesar de que cada manual específicamente dice que no.

Finalmente, asegúrese de que la pipeta se haya limpiado y calibrado y que tenga el tamaño correcto (generalmente es mejor equivocarse con los volúmenes más grandes de una pipeta determinada). Gaste dinero en buenas puntas de plástico para evitar quedarse pegado, y considere la posibilidad de pipeteo inverso para cosas difíciles. Una gran cantidad de consejos tienen marcas para volúmenes estándar como 10 o 100 μL, que son excelentes ayudas visuales para comprobar si algo está mal. Además, extraiga el líquido lentamente si es muy viscoso; demasiado rápido puede conducir a imprecisiones.

Sam y Malcolm están en lo cierto en mi propia experiencia. Yo agregaría algunas consideraciones más. 1) Dependiendo de lo que esté elaborando, la velocidad con la que se realiza la acción puede ser importante (por ejemplo, a veces los sorteos lentos son críticos). 2) La entrega puede, por supuesto, ser aún más crítica (por ejemplo, velocidad, ubicación de colocación de la punta, etc.). 3) Si se requieren pasos de pipeteo secuenciales rápidos, querrá que las diversas pipetas y suministros de puntas se configuren correctamente en su banco de trabajo. 4) Si es necesario, practique la rutina de pipeteo específica para un experimento en particular ANTES de comenzar el experimento real, para evitar errores y la posible necesidad de repetir.

Manteniéndolo en un nivel aleatorio.
Para la pipeta de 10-100μl, es mejor mantenerlo en 100μl (máximo) nivel. De lo contrario, su resorte se mantendrá en forma comprimida que podría alterar las características de aspiración y dispensación de la pipeta en el uso futuro.

No realicé una encuesta formal, pero me imagino que uno de los errores más prevalentes y perniciosos sería el uso de pipetas no calibradas.

A menos que sea realmente observador, sería muy difícil saber si su tubo está a unos pocos micrófonos, y no importa cuán buena sea su técnica, usted todavía estará desconectado. En mi experiencia, la calibración no es una gran prioridad en los laboratorios y, a menos que tengas esas calcomanías “calibradas por última vez” en tu pipeta (que rara vez veo), podrían pasar dos o tres años entre calibraciones. Esos pequeños son frágiles y quién sabe si un golpe en el camino equivocado o lo que sea podría desalentarlos un poco.