Western Blot es un nombre de broma, el tipo que inventó un método similar para detectar ADN se llamó Edwin Southern y Southern blot se convirtió en procedimiento. Northern blots y Western blots fueron nombrados en recuerdo de Southern … Podría venir una mancha oriental algún día.
El Western blot está diseñado para detectar proteínas. Las proteínas se purifican primero de las células y luego se separan. Durante la separación, debe elegir si desea mantener las proteínas naturales o desnaturalizarlas. Las proteínas desnaturalizadas a menudo son más fáciles de separar, pero es posible que esté buscando variaciones morfológicas. La separación generalmente se realiza en un gel seguido de electroforesis.
A menudo, el gel se tiñe después de la electroforesis para que los proeinas sean visibles. Esto se hace para asegurarse de que la electroforesis funcionó.
Luego, las proteínas se transfieren desde el gel a una membrana, generalmente nitrocelulosa, de nuevo se realiza la electroforesis para el procedimiento de transferencia.
Inmediatamente después del borrado, la membrana está bloqueada, por lo que ninguna otra proteína se adherirá a la membrana.
Después del borrado, se induce la membrana para que se puedan detectar las proteínas. Por lo general, se utilizarán anticuerpos específicos para la proteína exacta con la que está trabajando.
Luego se agrega un anticuerpo secundario que puede unirse al primer anticuerpo y el anticuerpo secundario tiene algún tipo de mecanismo de detección, ya sea fluorescencia, radioactividad o color.
La mancha terminada y el gel teñido generalmente se usan juntos como referencia.
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Ahora para los usos, bueno, puede usarse para detectar proteínas, sin embargo, solo proteínas para las que tienes anticuerpos.
Se utilizó para detectar enfermedades en las que la longitud, el número de proteínas o la forma de la proteína podrían indicar qué enfermedad era, pero hoy en día usamos principalmente ELISA o pruebas genéticas para eso.
