¿Alguien puede simplificar el Ensayo inmunosorbente ligado a enzimas (EIA)?

El Ensayo de inmunoabsorción ligado a enzimas, o ELISA, es una técnica bioquímica utilizada principalmente en inmunología para detectar la presencia de un anticuerpo o un antígeno en una muestra.

Utiliza dos anticuerpos. Un anticuerpo es específico para el antígeno. El otro reacciona a complejos antígeno-anticuerpo y se acopla a una enzima. Este segundo anticuerpo, que representa “enzimático” en el nombre de la prueba, también puede causar que un sustrato cromogénico o fluorogénico produzca una señal.

Debido a que el ELISA puede realizarse para evaluar la presencia de antígeno o la presencia de anticuerpos en una muestra, es una herramienta útil tanto para determinar las concentraciones de anticuerpos en suero (como con el virus de la inmunodeficiencia humana, VIH o el virus del Nilo occidental) y también detectar la presencia de antígeno.

Los pasos del ELISA general, “indirecto”, para determinar las concentraciones de anticuerpos en suero son

• Aplique una muestra de antígeno conocido a una superficie, a menudo el pozo de una placa de microtitulación.
• El antígeno se fija a la superficie para inmovilizarlo. Los pocillos de la placa u otra superficie se recubren con muestras de suero de concentración desconocida de anticuerpos, generalmente diluidas en suero de otras especies.
• El uso de suero no humano evita que los anticuerpos no específicos en la sangre del paciente se unan al antígeno.
• La placa se lava, por lo que se elimina el anticuerpo no unido. Después de este lavado, solo los complejos anticuerpo-antígeno permanecen unidos al pocillo.
• Los segundos anticuerpos, que se unirán a cualquier complejo antígeno-anticuerpo, se agregan a los pocillos.
• Estos segundos anticuerpos están acoplados a la enzima modificadora del sustrato. Lave la placa, de manera que se eliminen los anticuerpos no unidos en exceso.
• Aplique un sustrato que la enzima convierta para provocar una señal cromogénica o fluorescente. Vea / cuantifique el resultado usando un espectrofotómetro u otro dispositivo óptico.

ELISA Sandwich:

• Prepare una superficie a la que se une una cantidad conocida de anticuerpo.
• Aplique la muestra que contiene antígeno a la placa.
• Lave la placa, de modo que se elimine el antígeno no unido.
• Aplique los anticuerpos ligados a enzimas que también son específicos del antígeno.
• Lave la placa, de modo que los anticuerpos no unidos se eliminen.
• Aplique una sustancia química que la enzima convierte en una señal fluorescente. Vea el resultado: si tiene fluorescencia, la muestra contiene antígeno.
• En este antígeno, se une tanto a los anticuerpos como al sandwiche, de ahí se conoce como sandwich ELISA.

ELISA competitivo: el tercer uso de ELISA es mediante unión competitiva. Los pasos para este ELISA son algo diferentes a los dos primeros ejemplos:

• El anticuerpo no marcado se incuba en presencia de su antígeno.
• Estos complejos anticuerpo / antígeno unidos se añaden luego a un pocillo recubierto con antígeno.
• La placa se lava, por lo que se elimina el anticuerpo no unido. (Mientras más antígeno en la muestra, menos anticuerpos podrán unirse al antígeno en el pozo, de ahí la “competencia”).
• Se agrega el anticuerpo secundario, específico para el anticuerpo primario. Este segundo anticuerpo está acoplado a la enzima.
• Se agrega un sustrato, y las enzimas restantes provocan una señal cromogénica o fluorescente.
• Para el ELISA competitivo, cuanto mayor es la concentración de antígeno original, más débil es la señal eventual.

Hay muchas versiones de EIA, ¡algunas más simples que otras! En su forma más simple, puede agregar anticuerpos ligados a una enzima al antígeno y medir la cantidad del complejo formado al medir la actividad de la enzima después de separar el complejo.

El ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas es aquel en el que la enzima está unida a un anticuerpo. Cuando el antígeno específico se une al anticuerpo 1, se agrega el segundo anticuerpo específico que es específico para el anticuerpo 1.

El segundo anticuerpo también está relacionado con una enzima en la región FC. Cuando se agrega sustrato, la reacción entre la enzima y el sustrato ocurre formando un producto.