Cómo decidir sobre el control en blanco y positivo y negativo en un ensayo enzimático o bioquímico

No estoy muy familiarizado con los ensayos de inhibición de enzimas, pero aquí solo daré algunos consejos comunes (ya menudo ignorados) sobre cómo elegir los controles.

Aprender a configurar el tipo correcto de controles es indiscutiblemente uno de los aspectos más importantes y básicos del diseño experimental, ya que no se puede demostrar y convencer a otras personas de que sus resultados experimentales son válidos y no artefactos sin buenos controles.

Hay dos pautas muy simples pero cruciales para saber cómo decidir sobre los controles correctos:

1. Sepa cómo funciona todo . Y con esto, me refiero a todo . Para cualquier protocolo que use, debe saber
• Lo que hace cada paso del protocolo
• Por qué se usan reactivos específicos en diferentes etapas
• Qué está pasando con tu muestra en cada paso
• Méritos y deméritos de su protocolo
• Protocolos o métodos alternativos que puede usar
2. Para cualquier muestra biológica que use, debe saber cosas como
• Las propiedades específicas de sus células / proteínas / ADN, lo que sea que esté usando
• El trasfondo de cómo funcionan tus células / proteínas / ADN (debes estar muy familiarizado con esto)
• Cómo pueden diferir de otras muestras similares
• Si hubo algo diferente / incorrecto sobre ellos antes de que comenzaras a usarlos
3. La razón por la que necesita saber todo esto sobre sus protocolos es para que pueda:
4. Solucionar problemas Porque si sabe cómo funciona su protocolo, entonces debería poder descubrir dónde pueden salir las cosas . Puede haber cientos de razones diferentes por las que un experimento puede escupir errores o datos engañosos sin que nadie lo note, incluso cuando la gente ha sido particularmente atenta. Ahora piense en todos los posibles resultados falsos que podría obtener si no presta atención a lo que está haciendo. Básicamente, antes de comenzar tu experimento:
• Haga una lista de verificación de todas las cosas que posiblemente podrían salir mal
• Controles de diseño que pueden demostrar si las cosas realmente no funcionaron o no en estos lugares
• Incluye tantos controles como sea posible

En términos generales, he notado que las revistas realmente buenas tienen datos respaldados por controles excelentes, tanto en el texto principal como en la información complementaria. Las revistas no tan agradables tienen datos basados ​​en controles algo incompletos, que a menudo hacen que no quiera confiar completamente en sus datos. Entonces sí, los controles son importantes.

Cómo decidir sobre los controles positivos / negativos:

Aplique los mismos principios cuando decida qué usar como controles positivos / negativos. ¿Qué tipo de cosas podrían salir mal que podrían darte falsos positivos o falsos negativos?

• Controles negativos: aquí debes eliminar todo lo que pueda hacer que tus experimentos salgan mal. Tal vez los almacenamientos intermedios que utiliza hacen que sus muestras se comporten de forma divertida, por lo que debe asegurarse de que los resultados que obtiene sean auténticos y no causados ​​por los almacenamientos intermedios. Quizás tenga interacciones no específicas entre las cosas en sus muestras, quizás haya demasiada variabilidad entre sus muestras reales (no de control); necesita muestras de control negativo para asegurarse de obtener resultados consistentes.
• Controles positivos: los necesita para asegurarse de que su experimento esté funcionando como debería, y que la falta de resultados no se deba solo a un protocolo incorrecto o reactivos malos. Tal vez tus enzimas estén siendo inactivadas por algo en el buffer, así que utiliza una muestra de control para asegurarte de que tus enzimas realmente funcionen.

El tipo de controles que realmente necesita varían según el experimento, por lo que la mejor manera de descubrirlos es revisar los buenos (y recientes) documentos en los que las personas hayan realizado experimentos similares anteriormente. Si aún tiene preguntas, no dude en preguntarlas aquí.