¿Cómo funciona la técnica de flujo detenido?

Stopped-flow es una técnica que permite la mezcla rápida de reactivos en solución .

En esencia, se eligen dos componentes que reaccionan juntos, llamémoslos “Proteína A” y “Ligando B”. ProteinA se inyecta en la jeringa de carga A, y LigandB en la jeringa de carga B, según el siguiente diagrama (¡disculpas por la imagen de baja calidad, no soy un artista!). Luego, las dos jeringas son empujadas al mismo tiempo por un ariete accionado por gas, y se inyectan en una cámara de mezclado , donde se mezclan (como era de esperar).

A continuación, la muestra recién mezclada entra rápidamente en una celda de observación (verde en la imagen inferior, mezcla amarilla y azul) donde la reacción se monitoriza en tiempo real mediante fluorescencia o espectroscopía de absorción. Esto significa que debe ser posible controlar su reacción por cualquiera de estos métodos, y no es inusual acoplar la reacción deseada a una reacción secundaria que puede controlarse (es decir, mirando el flujo de protones con un colorante fluorescente sensible al pH) .

Esta configuración es excelente para monitorear reacciones muy rápidas en tiempo real , ya que tiene un tiempo muerto de solo un par de milisegundos y un tiempo de integración muy rápido. Además, es bastante generoso para el material requerido, ya que cada empuje es solo ~ 0.1 ml pero puede ser mucho más bajo.

Después de la inyección en la celda de observación, el material que ya estaba en la celda se expulsa hacia la jeringa de parada. Después del siguiente empujón, este material es empujado a perder. Es muy importante que el aparato de flujo detenido se lave minuciosamente entre usos, ya que es muy fácil que se acumulen sustancias desagradables.

Tenga en cuenta que también hay instrumentos de flujo apagados , en los que la reacción se interrumpe después de un cierto tiempo, y la mezcla doble detiene el flujo , donde se pueden mezclar múltiples reactivos.