En general, hay dos enfoques muy diferentes para determinar la secuencia de la proteína.
Método 1: determinar la secuencia de la proteína indirectamente a través de la tecnología de secuenciación de ADN / ARNm. La secuenciación de ADN es una tecnología madura y se puede hacer en una forma de alto rendimiento. Su precisión en general es bien aceptada. Para que esto funcione, necesitarás tener la línea celular viva. Aquí hay una descripción del procedimiento común de Absolute Antibody.
Método 2: determinar directamente la secuencia de la proteína mediante espectrometría de masas. En este enfoque, la proteína es generalmente digerida por múltiples enzimas, luego cada muestra estará sujeta a un experimento de LC-MS / MS. Esos experimentos producirán cientos de miles de espectros en tándem. Esos espectros se convertirán algorítmicamente en secuencias de péptidos y la secuencia de proteínas se ensamblará a partir de los péptidos. Aquí hay un artículo de revisión, De Novo Antibody Sequencing with Mass Spectrometry, de Rapid Novor Inc, que lo explicó bastante bien.
Espero que esto ayude.
