¿Cómo se puede medir la pérdida de la integridad de la membrana plasmática de una célula?

Esto generalmente se realiza a través de imágenes de las concentraciones de calcio. El calcio no puede atravesar la membrana celular por sí mismo y la célula mantiene un fuerte gradiente de calcio mediante el bombeo activo de calcio de la célula. El resultado es una concentración de calcio aproximadamente 12000 veces menor dentro de la célula que en el exterior. Si se rompe la integridad de la membrana, la afluencia de calcio a través de los agujeros en la membrana equilibra rápidamente las concentraciones internas y externas.

Entonces, lo que necesita es un químico que cambie las propiedades de alguna manera después de unir el calcio que es fácil de detectar. El método de detección más fácil y útil suele ser Fluorescencia. El colorante Fura 2 tiene la propiedad útil de cambiar las longitudes de onda de excitación cuando se une al calcio

fuente Widefield Calcium Imaging con indicador de calcio Fura2

Fura2 en sí no puede cruzar la membrana celular. La versión esterificada de Fura2, Fura2AM, puede. Además, una vez dentro, las esterasas celulares convierten Fura2AM en Fura2. Esto sugiere el siguiente procedimiento:

1. Baña las células en Fura2AM
2. Espere a que las células conviertan Fura2AM en Fura2
3. Lava los medios circundantes
4. Agregue el agente que sospecha que causa la interrupción de la membrana
5. Registre la imagen fluorescente resultante, cambiando la longitud de onda de excitación para capturar las formas unida (340 nm) y no unida (380 nm)

El resultado es algo como esto:

que muestra la formación de poros mediante diferentes preparaciones del péptido Amyloid-beta formador de poros. Desregulación del calcio y disrupción de la membrana como un mecanismo neurotóxico ubicuo de oligómeros amiloides solubles.

Hay un último problema. Debe determinar si el agente que está agregando está realmente alterando la membrana o simplemente activando canales internos de calcio. Esto generalmente se hace repitiendo el experimento en presencia de un bloqueador de los canales de calcio como el cobalto.