Siempre y cuando no exija exactamente la misma actividad, es probable que haya algunas sustituciones que no modifiquen la actividad en gran medida. También depende de las condiciones, esp. temperatura.
Las llamadas mutaciones sensibles a la temperatura afectan la función de la proteína a temperaturas altas o (raramente) bajas, en comparación con la temperatura del organismo que contiene la proteína. En mi investigación de posgrado, aislé un mutante TS de E. Coli en el que la enzima biosintética de los ácidos grasos malonil-CoA-ACP transacilasa funcionaba a 25-30 ° C in vivo, pero no a 37 grados. Es un caso inusual en el que una proteína sensible a la temperatura funciona en absoluto fuera de la célula. Esta proteína fue una excepción. En ensayos in vitro, funcionó a 30 grados pero se volvió inestable a temperaturas mayores que eso. Por lo tanto, mida la actividad a 25 o 30 grados C y encontrará una enzima que funcione. Pruebe el ensayo después de incubar el extracto de la enzima a 37 grados y no encontrará nada.
Además, existen mutaciones “neutrales”. Presumiblemente, al menos algunos de estos tienen proteínas con sustituciones aa que no afectan sustancialmente la función. Un ejemplo extraño es un mutante en una proteína bien estudiada que dejó una cavidad en la estructura de la proteína. Cuando se añadió xenón a la solución de ensayo, se restauraron la estructura y la actividad nativas. De acuerdo con la cristalografía de rayos X, la gran hidrófoba Xe datom llenó el vacío, permitiendo el funcionamiento completo.
