La técnica que se describe en este documento utiliza levadura para ensamblar muchos fragmentos de ADN superpuestos (hasta 38) en un solo vector seleccionable. Las levaduras son el organismo de elección para este enfoque, ya que son capaces de realizar una recombinación homóloga increíblemente eficiente, un proceso que permite ensamblar ADNds con tan solo 20 nucleótidos de superposición de secuencias.
Uno de los desafíos con la levadura es que son significativamente más difíciles de transformar que la E. coli. Tienen una pared celular gruesa que hace que las transformaciones sean bastante ineficaces: ¡un veneno absoluto para una técnica que intenta colocar casi 40 fragmentos diferentes de ADN en la misma celda! Los esferoblastos son células cuyas paredes celulares se han eliminado, lo que aumenta drásticamente las eficiencias de transformación y permite que se utilicen técnicas que requieren múltiples eventos de transformación por célula.
Tenga en cuenta que este sigue siendo un proceso bastante ineficiente: de 100 millones de células transformadas, alrededor de 1000 hicieron algo que les permitió escapar de la selección, y (extrapolando del puñado de colonias que caracterizaron los autores) aproximadamente la mitad de las construyeron correctamente.
