Un artículo publicado este mes (diciembre de 2013) en el Journal of Biomolecular Techniques responde a esta pregunta [1]:
Las muestras de orina congeladas se descongelaron a temperatura ambiente y luego se colocaron inmediatamente en hielo antes del aislamiento del ADN. La muestra de orina se invirtió o se arremolinó en una copa de muestra para crear una suspensión homogénea de células. Se transfirió un mililitro de la muestra a un tubo Eppendorf y se centrifugó (Eppendorf 5415R) durante 10 min a 10.000 g (4 ° C). El sobrenadante se eliminó, y un sedimento seco que contenía células se enfrió a -20 ° C durante 15 min. Se añadió tampón de lisis (500 μl, Tris 10 mM, EDTA 1,2 mM, SDS al 10%, pH 9,0) al sedimento seco, y la muestra se agitó en vórtice para resuspender el sedimento. Se añadió proteinasa K (20 μl de 20 mg / ml; Himedia) y el tubo se incubó en un baño de agua (CW-30G; Jeio Tech, Seúl, Corea) a 56 ° C durante 2 h. Se añadieron acetato de sodio (60 μl de 3 M) y 0,5 ml de isopropanol frío, se mezclaron y se enfriaron a -20 ° C durante 1 h, seguido de centrifugación a 10.000 g (a 4 ° C) durante 20 min. El sobrenadante se descartó, se añadieron 250 μl de etanol al 70% y el gránulo se golpeó suavemente, seguido de centrifugación a 10.000 rpm durante 10 minutos antes de que el sobrenadante se descartara suavemente. El sedimento se secó al aire en un flujo de aire laminar, y el sedimento seco se resuspendió en 50 μl de agua sin nucleasa o tampón TE 1x y se congeló a -20ºC o -80ºC para su almacenamiento.
Siga este protocolo lo más cerca posible.
[1] Un método simple de extracción de ADN genómico de muestras humanas para el análisis de PCR-RFLP
