UV-Vis mide las características de las moléculas absorbiendo luz que excita electrones en orbitales Pi. Para esta pregunta, nos interesa saber qué sistemas conjugados Pi se emocionan.
Para las proteínas, la absorbancia está relacionada con los anillos de tirosina, fenilalanina y triptófano.
La lectura de 260 nm para los ácidos nucleicos está relacionada con las nucleobases.
El anillo fenol de fenilalanina en realidad absorbe débilmente a 260 por lo que las características dominantes de UV-vis de las proteínas son el tirosilo y el indol que absorben a 280 nm. Por el contrario, las nucleobases absorben bien a 260 nm. Dado que esas características son exclusivas de las proteínas y los ácidos nucleicos, respectivamente, tendría sentido medir esos valores.
Una cosa importante a tener en cuenta es que los enlaces peptídicos absorberán a 230 pero también lo harán los fenoles y azúcares. Sin embargo, usar la relación 230: 260 y la relación 260: 280 dará una buena idea de qué tan puras son las muestras de ADN o proteína.
