La estructura del sitio activo de una enzima (y el resto de la enzima) se puede determinar a través de técnicas de imagen cristalográficas y otras.
Sin embargo, determinar los aminoácidos específicos en el sitio es una cuestión diferente.
Algunos métodos probados son:
- ” Congelar ” el complejo enzima-sustrato (ES) para hacerlo inactivo, luego hidrolizarlo para obtener el sustrato que aún estaría unido al aminoácido catalítico. Esto se puede hacer utilizando un sustrato análogo que puede formar un complejo ES ultra estable, que se disocia muy lentamente, o degradando el ES por completo tan pronto como se agrega el sustrato.
- Modificando la enzima por alteración química de los aminoácidos uno a la vez, o modificando su estructura primaria usando proteasas para eliminar ciertos aminoácidos en diferentes ubicaciones.
- Reemplazo de aminoácidos en diferentes posiciones mediante mutagénesis dirigida. SI el reemplazo de un aminoácido en un sitio particular causa una disminución en la actividad enzimática, significa que forma parte del sitio activo.
Espero que esto responda tu pregunta …
