La optimización de anticuerpos (AB) se refiere principalmente a la especificidad del anticuerpo. Por lo general, se somete a diferentes etapas de selección hasta que esté listo.
1. Se realizará análisis de Western Blot (WB), citometría de flujo, inmunofluorescencia (IF) e inmunohistoquimioterapia. Esto mostrará si el anticuerpo está marcando el objetivo esperado, por ejemplo determinando el tamaño de la proteína detectada en WB o detectando una señal fluorescente donde se esperaría en IF (el núcleo o la membrana celular, por ejemplo).
2. El anticuerpo se examinará en microarrays de proteínas de alta densidad. Esas son matrices que presentan un gran conjunto de epítopes al AB. Se puede detectar una señal en puntos donde el AB se ha unido a un epítopo. Si un AB es específico, solo se unirá a su proteína objetivo. Pero a veces proteínas similares comparten epítopos (por ejemplo, HER2 y HER4). Dado que esas proteínas similares a menudo también son similares en tamaño y localización, la primera pantalla con WB e IF no puede detectar anticuerpos no específicos de reacción cruzada.
3. Si el AB pasa el microarreglo, debe ser reevaluado por WB, IF, etc., para asegurarse de que todavía funciona para esas aplicaciones. Ahora puedes confiar en que las proteínas detectadas son, de hecho, las proteínas correctas. Después de eso, el AB está listo para funcionar.
Tenga en cuenta que no todas las empresas se toman la molestia de probar la especificidad. Esto está bien para algunos experimentos, pero para otros necesitará alta especificidad (inmunoprecipitación de la cromatina, por ejemplo). La alta especificidad también es crucial en el AB terapéutico. Trastuzumab tiene que ser específico para HER2 y no debe reaccionar de forma cruzada con otras proteínas para funcionar correctamente.
Espero que ayude.
