¿Por qué se utiliza el sulfato de amonio para “salar” las proteínas?

Dos palabras: serie de Hofmeister. imagen de: la serie Hofmeister (verde a rojo-> kosmotropes a caotropes) Hofmeister realizó experimentos de salazón en clara de huevo (ovoalbúmina) con diferentes sales en 1888. Se le ocurrió esta serie. En base…
¿Puedo separar los agregados de proteína de la proteína soluble y probarlos con SDS PAGE?

Desea utilizar PAGE nativa, cromatografía de exclusión de tamaño o electroforesis capilar para la segunda parte de este experimento. Si la agregación es reversible, puede que necesite reticular químicamente los agregados para evitar que se disocien durante su…
¿Cómo se separa la electroforesis en gel de los aminoácidos sin carga?

Los geles desnaturalizantes de poliacrilamida (en otras palabras, geles que despliegan proteínas y las obligan a permanecer desplegadas a medida que migran) separan las proteínas en función de la masa, no de la carga. Esto se debe a…
Bioquímica: ¿Por qué el sistema de sistema de dos híbridos de levadura tiene baja especificidad?

Hay algunas proteínas que se unirán a casi cualquier cosa, por lo que habrá muchos resultados positivos falsos. Recuerdo un postdoc en el laboratorio donde hice mi doctorado una vez que pasé MUCHO tiempo en una pantalla de…
¿Qué membrana de ultrafiltración debería usar para filtrar proteínas de 3-7 kDa del plasma humano?

Supongo que querrías una membrana bastante apretada con un MWCO de ~ 7-10 kDa, ¿no? ¿O ya tiene un stock de membranas con varios límites de MWCO y necesita elegir uno de un rango limitado, es eso lo…
¿Cuál es la forma más sencilla de eliminar una etiqueta His?

Sugeriría insertar un sitio de segmentación justo antes, al agregar la etiqueta a su proteína de interés. Por ejemplo, un sitio de escisión de TEV. Una vez que haya lavado bien su columna de níquel, podría eluir la…
¿Cuáles son los principios detrás de Western Blot? ¿Cuáles son sus aplicaciones?

Western Blot es un nombre de broma, el tipo que inventó un método similar para detectar ADN se llamó Edwin Southern y Southern blot se convirtió en procedimiento. Northern blots y Western blots fueron nombrados en recuerdo de…
¿Cómo funcionan los ensayos de pulldown?

El ensayo de reducción de proteínas es un método de purificación de afinidad in vitro que utiliza una proteína de cebo para enriquecer las proteínas que interactúan con la proteína del cebo. Puede usarse para la confirmación de…
¿Cuáles son los errores más comunes en la técnica de pipeteo?

Otros han cubierto micropipetas. Déjame cubrir las pipetas graduadas y las pipetas volumétricas (ya conoces esas cosas de vidrio). Oh sí, puedes cometer errores cuando los usas también. Editar: el ítem 1 de la lista ha sido corregido…
¿Por qué las membranas biológicas son aptas para el equilibrio de la centrifugación de la densidad de sacarosa, mientras que las proteínas no lo son?

La centrifugación de densidad de sacarosa se utiliza en proteínas, de hecho se usa para separar proteínas entre sí en función de la densidad. A menudo se usa para purificar virus envueltos, y la envoltura de un virus…