El ensayo de doble color reporter es un término un tanto vago, pero usaré el Luciferase Dual Reporter Assay como ejemplo.
Este ensayo se usa típicamente para determinar los niveles de expresión génica y para evaluar la capacidad de los promotores para mejorar la expresión génica. Hay dos genes Luciferase utilizados en este ensayo (Firefly y Renilla) de ahí el informe doble, parte.
Supongamos que ha encontrado un promotor y desea examinar una biblioteca de compuestos por su capacidad de unirse a este promotor e inducir la transcripción génica. En primer lugar, clonaría la secuencia de ADN del promotor cadena arriba del gen de Luciferasa de Firefly en un vector de expresión y luego transformaría / transfectaría el plásmido en su sistema modelo de elección.
A continuación, construye un vector de control para expresar constitutivamente la Renilla Luciferasa y también co-transformar / transfectar sus células con plásmido.
Para realizar un ensayo, puede configurar placas de 96 pocillos para un experimento de tipo de pantalla de alto rendimiento. Cada pozo tendrá un compuesto de biblioteca diferente. Después de una cierta cantidad de tiempo de incubación, las células se permeabilizan y se añaden los sustratos de luciferasa de Firefly y la actividad de reacción se mide por su bioluminiscencia. Una vez que la actividad ha alcanzado el estado estable, se agrega un compuesto para extinguir la actividad de luciferasa de luciérnaga y luego se añaden los sustratos de luciferasa de Renilla para asegurar que se está produciendo la expresión génica exógena. La producción de luciferasa de Renilla es independiente de la modulación experimental del elemento de respuesta del gen de interés.
