¿Cuál es una técnica para medir proteínas?

Depende de lo que quieras medir. ¿Es concentración? ¿Es peso molecular? ¿Es hidrofobia?

Las proteínas son estructuras muy dinámicas y se pueden aplicar muchas medidas diferentes para cuantificar sus propiedades.

Sin embargo, si desea medir la concentración de proteínas en una muestra dada, la técnica estándar sería espectrofotometría, que se basa en el hecho de que los residuos de la proteína pueden absorber ciertas longitudes de onda y, por lo tanto, puede cuantificar la cantidad de luz absorbida, que es proporcional a la concentración. (Ley empírica de Beer-Lambert).

Si desea cuantificar el peso molecular de tales moléculas, una SDS-PAGE (electroforesis en gel de poliacrilamida con dodecilsulfato de sodio) sería la técnica estándar, que consiste en dar a la proteína desnaturalizada una carga negativa proporcional al número de residuos y luego hacer la las proteínas pasan por un gel aplicando un campo eléctrico. Las proteínas más grandes irán más despacio porque tienen más problemas para pasar por el gel, las proteínas más pequeñas irán más rápido. Finalmente, los resultados se comparan con diferentes muestras de proteínas de peso conocido.

Hay muchas más técnicas que puedes encontrar en cualquier libro de texto sobre bioquímica experimental.

Espero que haya sido de ayuda.

Si está hablando de medir la concentración de proteína purificada, entonces el método más fácil de elección generalmente sería usar el ESPECTROFOTÓMETRO UV / VIS. Este instrumento se usa para medir la absorbancia de la proteína en longitudes de onda particulares (280 nm, 260 nm). A 280 nm, los residuos de triptófano, tirosina y citosina absorben la luz y esta absorbancia puede considerarse proporcional a la concentración de proteína. Concentración de proteína = Absorbancia (280 nm) co Coeficiente de extinción molar a 280 nm.

El coeficiente de extinción molar es único para cada proteína y generalmente viene dado por la fórmula = (n. ° de triptófanos * coeficiente de extinción del triptófano) + (n. ° de tirosinas * coeficiente de extinción de tirosinas) + (n. ° de cisteínas * coeficiente de extinción de cisteínas). Esto se simplifica como –

(Fuente -ThermoScientific)

Donde nW – no. de triptófanos, nY -no. de tirosinas, nC – no.de cisteínas.

La absorbancia se mide generalmente a 280 nm y 260 nm y se analiza su relación (A280 / A260). Por lo general, la relación debe ser superior a 1,5 para considerarla una solución de proteína pura.

Hay varias otras técnicas y también se mencionan en otras respuestas:

  1. Método Bradford
  2. Ensayo de ácido Bicinchonic
  3. Método de Lowry

Estas técnicas se emplean generalmente cuando no hay ni siquiera un residuo de triptófano o tirosina en la proteína.

Hay varias técnicas para estimar las proteínas.

  1. Método de Lowry
  2. Método Bradford
  3. Método Biuret
  4. Método Kjeldahl

Espero que esto ayude.

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