Cómo estudiar oligómeros de proteínas de membrana

En primer lugar, necesitaría saber si es un homo-oligómero u heterooligómero, donde el sitio activo es (específicamente, los dominios transmembrana y citosólico necesarios para la función), y qué exactamente sobre eso le gustaría estudiar. .

Un método de bajo rendimiento implicaría el uso de detergentes para romper la membrana plasmática en las células que se han inducido a crear la proteína. Luego puede purificar la proteína por cualquier cantidad de métodos, con la esperanza de que el complejo proteico permanezca intacto sin estar unido a la membrana.

Otro método es hacer que el complejo sea soluble. Esto requiere la adición de una secuencia señal al extremo N (o terminal si es hetero oligomérico), así como (lo más probable) la eliminación de los dominios transmembrana y citosólico (dependiendo, de nuevo, de las proteínas). Usualmente, después de la eliminación de estos dominios, una proteína no mantendrá su estructura nativa sin la introducción de mutaciones para promover la asociación intermolecular, o un motivo de estabilización heterólogo (como el motivo T4 Fibritin Foldon para proteínas triméricas).

Hay muchos métodos que abordan las proteínas de membrana. Los oligómeros de las proteínas de membrana se pueden estudiar mediante muchos de los mismos métodos. Antes de que pueda responder a esta pregunta, necesitaría saber específicamente qué desea saber sobre los oligómeros de proteínas de membrana. También sería valioso saber lo que ya sabes sobre esta proteína de membrana en particular. Por ejemplo, ¿ya tienes una versión recombinante? Si es así, ¿ha revisado para ver si hay modificaciones postraduccionales a la proteína nativa?

Si está preguntando sobre una proteína de membrana específica, buscaría en la literatura qué técnicas usan otras personas. Eso debería darte algunas buenas ideas.

Se ha dicho que entre el 50% y el 90% de las buenas ciencias hacen la pregunta correcta. Me temo que la pregunta que ha hecho es demasiado vaga para ser considerada la “pregunta correcta”. Dedique algún tiempo a definir de forma más restringida la pregunta que desea formular; luego, la respuesta sobre cómo hacer el experimento debería ser más clara.

También puede etiquetar sus proteínas con un marcador fluorescente y utilizar técnicas de microscopía como la espectroscopía de correlación de fluorescencia (FCS) o la microscopía de fluorescencia de reflexión interna total (TIRF). También puede probar Microscopía de fuerza atómica (no se necesita etiquetado).