¿Por qué es difícil analizar la estructura de las proteínas con cristales pequeños mediante el uso de cristalografía de rayos X estándar?

En breve, porque los cristales pequeños se dañan fácilmente con rayos X. Sin embargo, hacer cristales grandes no siempre es posible :).

Por lo tanto, un pulso de rayos X realmente poderoso se dirige hacia la pulverización de dichos cristales (todo sucede en un láser de electrones libres, FEL), el pulso golpea un cristal individual orientado al azar. Difracción de rayos X (como en la cristalografía normal de rayos X), mientras que el cristal estalla y se evapora.

De modo que no queda cristal, sin embargo, toda la radiación es detectada por detectores muy rápidos y puede usarse posteriormente para resolver la estructura. La duración de un único pulso de rayos X es de alrededor de 30 femtosegundos, por lo que puede imaginar aproximadamente cuántos datos se recopilan durante un experimento de 1 minuto. Hay muchos pulsos que no afectan a ningún cristal, pero si el flujo de cristal está optimizado, entonces estás en buen camino para la recopilación de datos :).

  1. Algunas proteínas no se cristalizan fácilmente mediante el uso del procedimiento estándar.
  2. La cristalografía de rayos X solo puede determinar la longitud de enlace y el ángulo de enlace de la proteína, pero no puede determinar la composición atómica de la proteína (que solo puede analizarse mediante H1NMR, espectroscopía IF, etc.).