¿Cómo se producen los anticuerpos monoclonales?

Tecnología de hibridoma utilizada para la producción de ab monoclonal.

1. Las células de mieloma utilizadas en la tecnología de hibridoma no deben ser capaces de sintetizar sus propios anticuerpos.
2. La selección de células de hibridoma se basa en la inhibición de la maquinaria de síntesis de nucleótidos.
3. Las células de mamífero pueden sintetizar nucleótidos mediante dos vías de síntesis de novo y vía de rescate.
4. La síntesis de novo de nucleótidos requiere tetrahidrofolato que se forma a partir de dihidrofolato.
5. La formación de tetrahidrofolato (y por lo tanto nucleótidos) puede ser bloqueada por el inhibidor aminopterina.
6. La ruta de rescate implica la conversión de purinas y pirimidinas en los nucleótidos correspondientes.
7. La hipoxantina guanina fosforribosil transferasa (HGPRT) es una enzima en la ruta de rescate de las purinas.
8. Convierte hipoxantina y guanina en monofosfato de inosina y monofosfato de guanosina.
9. La timidina quinasa (TK), participó en la vía de rescate de la pirimidina convierte timidina a timidina monofosfato.
10. Cuando las células deficientes (células mutadas) en HGPRT se cultivan en un medio que contiene hipoxantina aminopterina y timidina (medio HAT), no pueden sobrevivir debido a la inhibición de la síntesis de novo de nucleótidos de purina.
11. (Nota: la vía de rescate no está operativa debido a la falta de HGPRT).
12. Por lo tanto, las células que carecen de HGPRT, cultivadas en medio HAT mueren.
13. Las células de hibridoma poseen la capacidad de las células de mieloma para crecer in vitro con un gen de HGPRT funcional obtenido a partir de linfocitos (con el que se fusionan las células de mieloma).

Por lo tanto, solo las células de hibridoma pueden proliferar en medio HAT, y este procedimiento se usa con éxito para su selección.