Voy a explicar sobre la preparación de lisados de células (eucarióticas / procariotas) y tejidos, usando solución salina tamponada con fosfato. Este lisado contiene proteínas a partir de las cuales puede aislarlas o usarlas directamente para análisis, ya sea enzimático o ELISA o métodos de inmuno blot.
Use cold 1x PBS con cóctel inhibidor de proteasa o un equivalente. Resuspenda las células en PBS y pipetee bien. Después de esto, puede utilizar un homogenizador de manos para hacer puré de ellos o utilizar una aguja de jeringa para aspirar y liberar, que romperá las células o congelará los ciclos de descongelación que volverán a lisar las células. La mejor opción sería la sonicación (sonicador de sonda / baño de agua). Del mismo modo para los tejidos, puede homogeneizar en tampón frío y la mejor opción es sonicar.
Después de la preparación del lisado, centrifugar a 5000-10000 rpm durante 5 minutos a 4 grados Celsius y almacenar el sobrenadante. Puede usar el mismo para la estimación de proteínas ya que no interferirá con los métodos de estimación de proteínas.
Espero eso ayude..
